淺析國產酶標儀分析原理

　　國產酶標儀酶免疫分析是基于酶催化反應的特性來進行檢測和定量分析免疫反應。在實踐上，首先要讓酶標記的抗體或抗原與相應的配體（抗原或抗體）發生反應，然后再加入酶底物。酶催化反應發生后，可通過檢測下降的酶底物濃度或升高的酶催化產物濃度來達到檢測或定量分析抗原抗體反應的目的。

　　一、酶免疫分析的基本原理酶是一種能催化化學反應的特殊蛋白質，其催化效力超過目前所有的人造催化劑，一般可使反應加速108一1010倍。此外，酶還具有高度的專一性，即每一種酶只催化一種或一組密切相關的化學反應。EIA是將酶催化的放大作用與抗原、抗體的免疫反應相結合的一種微量分析技術。酶標記抗體或抗原后，既不影響抗體或抗原的免疫反應特異性，也不改變酶本身的催化活性，即在相應的反應底物參與下，標記的酶可以使底物基質水解而呈色，或使供氫體由無色的還原型轉變為有色的氧化型，這種有色產物可以通過肉眼、光學顯微鏡或電子顯微鏡進行觀察，也可以用分光光度計加以測定。呈色反應顯示了反應體系中酶，即被標記的抗體（或抗原）的存在，從而證明發生了相應的免疫學反應。因此，EIA是一種特異而敏感的檢測技術，可以在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，也可以在微克、甚至納克水平上對其進行半定量、定量測定。

　　二、酶免疫分析方法中的主要組成部分

　　（一）固相載體非均相EIA免疫實驗所用的固相載體應具備以下條件：①可結合抗體（抗原）的容量大、種類多；②可將抗體（抗原）牢固地固定在其表面，雖經長期保存和多次洗滌也不脫落；③不影響所固定抗體（抗原）的免疫反應性；④抗體的Fc段（或抗原）被固定在載體上時其與抗原（抗體）的結合空間位點應朝向反應液。常用的材料有：1．塑料如由聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的微孔反應板（48孔、96孔）或小珠、小試管等產品，是目前應用zui廣、zui普及的一種固相載體，主要通過非共價鍵吸附抗原或抗體。該類載體的應用可以簡化整個EIA的操作步驟，使之易于實現自動化。2、可磁化顆粒或瓊脂糖珠這類固相載體通過共價鍵結合抗原或抗體，在檢測中可分散到整個反應混合液中，有很大的表面積，結合容量較大，因此結合較為有效，使免疫反應得以迅速進行；但制備固相抗體有較嚴格的技術要求。

　　（二）包被蛋白經過純化后，大部分抗原、抗體都可作為ELA反應的包被蛋白。抗原或抗體的濃度高，吸附在載體表面的也越多。

　　（三）待測樣品EIA中的待測樣品可以為細胞、血清、腦脊液、胸腹水及其他體液中的任何抗原、抗體，某些反應，如間接法檢測丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、競爭抑制法檢測乙型病毒性肝炎核心區外型抗體（抗-HBcIgG）等需要對待測樣品進行稀釋后再進行分析.

　　（四）酶標記物酶標記物是指將酶通過某些化學物（交聯劑）和抗原、抗體、Fab片段等蛋白結合在一起的復合物，利用該復合物可以檢測相對應的免疫反應原性蛋白。目前常用的交聯劑有：戊二醛、氟二硝基苯、過碘酸鈉等。

　　（五）各種緩沖液如：包被液、封閉液、稀釋液、洗液、顯色底物和緩沖液、終止液等。